Предмет и задачи клинической микробиологии. Роль ученых в развитии клинической микробиологии
Клиническая микробиология — раздел медицинской микробиологии, изучающий этиологию, патогенез, систематику и биологические признаки микроорганизмов. Главной целью этой науки является глубокое исследование патогенных и условно-патогенных микробов, их взаимодействия с иммунной системой человека, а также разработка и совершенствование новых методов микробиологических исследований, лечебных препаратов для ликвидации, эффективной терапии и профилактики инфекционных заболеваний.
В основе клинической микробиологии лежат лабораторные исследования микроорганизмов. Основная их задача — выявление и идентификация возбудителей, иммунных сдвигов и прочих факторов развития заболеваний. Преимущество перед другими видами клинической диагностики заключается в высокой достоверности результатов таких исследований. С помощью современного оборудования и новейших технологий микробиологии можно точно определить тип вируса, его биологические свойства, а также чувствительность к терапии антибиотиками и другими препаратами. Одним из основоположников иммунологии явился И.И.МЕЧНИКОВ (1845-1916) — создатель фагоцитарной, или клеточной, теории иммунитета. В 1888 г. Мечников принял приглашение Пастера и возглавил лабораторию в его институте.
Главным центром Перербургской бактериологической школы стал Институт экспериментальной медицины. Заведующим бактериологическим отделом был утвержден С.Н.ВИНОГРАДСКИЙ, получивший мировую известность своими работами в области общей микробиологии. С помощью разработанного им метода элективных культур. Виноградский открыл серо- и железобактерии, нитрифицирующие бактерии — возбудители процесса нитрификации в почве. Он основал роль микроорганизмов в сельском хозяйстве.
Морфология основных форм микроорганизмов
По форме микроорганизмы подразделяются на шаровидные, палочковидные, извитые.
1) Шаровидные бактерии — кокки (coccus — зерно) бывают сферической, эллипсовидной, бобовидной, ланцетовидной формы. По расположению, характеру деления кокки делятся на:
- Микрококки располагаются одиночно, беспорядочно. Являются сапрофитами, обитателями воды, воздуха.
- Диплококки (diploos- парные) делятся в одной плоскости и образуют парные кокки. К ним относятся патогенные — менингококки, гонококки, пневмококки.
- Стрептококки ( streptos- цепочка) делятся в одной плоскости, располагаются цепочками разной длины.
- Тетракокки — (tetra -четыре) располагаются по четыре, делятся в двух взаимно перпендикулярных плоскостях. Патогенных нет.
- Сарцины — (sarcina-тюк) делятся в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и выглядят в виде тюков, пакетов из 8 и более клеток.
Часто встречаются в воздухе. Патогенных не выявлено.
Микроорганизмы в круговороте веществ в природе
... которых в пищу развивается пищевая токсикоинфекция. Микрофлора воздуха Микрофлора воздуха взаимосвязана с микрофлорой почвы и воды. В воздух также попадают микроорганизмы из дыхательных путей и с ... представителями микрофлоры верхних дыхательных путей и имеют общий путь выделения с патогенными микроорганизмами, передающимися воздушно-капельным путем. С целью снижения микробной обсемененности воздуха ...
- Стафилококки (staphyle-виноградная гроздь) делятся в разных плоскостях, располагаются неправильными скоплениями. Некоторые виды вызывают заболевания.
2) Палочковидные бактерии тоже весьма разнообразны. Различаются по размерам, форме концов клетки, взаимному расположению клеток. Длина клеток варьирует от 1 до 8-20 мкм, толщина — 0,5 — 2мкм. Палочки м.б. правильной (кишечная палочка и др.) и неправильной (коринебактерии и др.) формы, ветвящиеся, например актиномицеты.
Концы палочек могут быть как бы:
- обрезанными (обрубленными) — сибиреязвенная бацилла,
- закругленными (кишечная палочка),
- заостренными (фузобактерии) или в виде утолщения (коринебактерии дифтерии),
- раздвоенные концы имеются в свежеизолированных культурах всех видов рода бифидобактерий, за что род и получил название.
Палочковидные подразделяются на бактерии, бациллы, клостридии. К бактериям относятся микроорганизмы, которые не образуют спор. К бациллам (bacillus-палочка) и клостридиям (closter-веретено) — образующие споры. Спорообразующие аэробные бактерии, у которых размер споры не превышает диаметра клетки, называются бациллами, а спорообразующие анаэробные бактерии, у которых размер споры превышает диаметр клетки, принимают форму веретена, называются клостридиями (clostridium -веретено).
3) Извитые формы бактерий. К этой группе бактерий относятся вибрионы, спириллы, спирохеты.
- Вибрионы (vibrio-извиваюсь) слегка изогнутые палочки, имеют вид запятой с полярным жгутиком (холерный вибрион).
- Спириллы (spira-изгиб) — извитые формы с одним-тремя витками с биполярными жгутиками — кампилобактерии
— Спирохеты (spira -изгиб, сhaite-волосы) спирально извитые, очень тонкие, очень подвижные. Среди них есть патогенные (относятся к 3-м родам Leptospira, Borrelia, Treponema), условно-патогенные и непатогенные виды, являющиеся представителями резидентной микрофлоры человека и животных.
4) Другие формы бактерий. Это большая группа бактерий, которые, как сказано выше, не вписываются по своей морфологии в три названных варианта. К ним относятся риккетсии, хламидии, микоплазмы, актиномицеты.Методы окраски бактерий
Окраску мазка производят простыми или сложными методами. Простые заключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю-Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение. Отношение микроорганизмов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.
Содержание, формы и методы обучения учащихся V-VII классов технологии ...
... занятиях по обработке древесины на основе личностно ориентированного подхода. 4. Произвести отбор и построение содержания форм и методов обучения учащихся V-VII классов технологии обработки ... учащихся в образовательной области «Технология» на основе личностно ориентированного подхода; результаты экспериментальной работы по обучению учащихся V-VII классов технологии обработки древесины на основе ...
При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые).
Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор — анион, то краситель имеет кислые свойства. Кислые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители — генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.
Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.
При сложных методах окраски используются ряд красок в определенной последовательности. Такие методы используются для выявления в патологическом материале конкретных микроорганизмов, а также определения особенностей их ультраструктуры.
Структура и химический состав бактериальной клетки
микроорганизм бактерия инфекционный
Основными структурами бактериальной клетки являются: клеточная стенка, ЦПМ, цитоплазма с включениями и ядро, называемое нуклеоидом. Бактерии могут иметь и дополнительные структуры: капсулу, микрокапсулу, слизь, жгутики, фимбрии, пили; некоторые бактерии способны образовывать споры.
Размеры бактерий измеряются в мкм. Один мкм равен 1000 нм. В нм измеряются отдельные компоненты бактерий.
Клеточная стенка (КС) представляет биогетерополимер сложного химического состава.
Клеточная стенка у бактерий выполняет многочисленные функции:
- придает клетке определенную форму;
- защищает ее от воздействия окружающей среды;
- несет на своей поверхности разнообразные рецепторы;
- через КС в клетку поступают питательные вещества и выделяются продукты обмена.
- пептидогликан придает эластичность и ригидность КС.
Пептидогликан КС является «мишенью» для действия некоторых антибиотиков, главным образом пенициллинов и фермента лизоцима. При действии пенициллина на растущую бактериальную клетку образуются безоболочные формы бактерий, лишенные КС. Их называют протопластами, сферопластами и L-формами. Первые полностью лишены КС, вторые — частично. Они приобретают сферическую форму вследствие отсутствия пептидогликана.
Бактерии, полностью или частично утратившие КС, но сохранившие способность к размножению, получили название L-форм в честь института им.Листера (Англия).
Строение и функции клетки
... Гольджи, клеточный центр. Мембрана. Если рассматривать в микроскоп клетку какого-нибудь растения, например, корешка лука, то ... внутреннее содержимое клетки. Растительную клетку можно отделить от наружной оболочки. Можно разрушить оболочку у бактерий. Тогда может ... тела (регенерация), является регулятором всех жизненных отправлений клетки. Форма ядра чаще всего шарообразная или яйцевидная. Важнейшей ...
Независимо от формы исходной клетки (кокки, палочки) L- формы этих бактерий морфологически неразличимы и представляют сферические образования. L-формы могут возникать в естественных условиях в организме человека в результате длительного лечения антибиотиками, чаще всего пенициллином.
Различают нестабильные и стабильные L -формы бактерий.
- первые способны к реверсии в исходный вид при устранении причины, вызвавшей их образование. Они восстанавливают способность синтезировать пептидогликан КС.
- Вторые, как правило, не способны к реверсии.
L-формы бактерий играют существенную роль в патогенезе многих инфекционных заболеваний.
Цитоплазматическая мембрана (ЦПМ) является жизненно необходимым структурным компонентом бактерий. Располагается под КС. Является трехслойной структурой. Состоит из двойного слоя липидов, главным образом фосфолипидов со встроенными поверхностными и интегральными белками, как бы насквозь пронизывающими структуру мембраны. Некоторые из них являются пермеазами, участвующими в транспорте веществ. ЦПМ является динамической структурой с подвижными компонентами, поэтому ее представляют как мобильную, текучую структуру. ЦПМ выполняет жизненно важные функции:
- участвует в регуляции осмотического давления,
- транспорте веществ,
- энергетическом метаболизме клетки,
- у ряда бактерий в спорообразовании.
Цитоплазма у прокариот, так же как и у эукариот, представляет сожную коллоидую систему, состоящую из воды (около 75%), минеральных соединений, белков, нуклеоида, рибосом, мезосом, включений.
Нуклеоид является эквивалентом ядра у эукариот. Он лишен ядерной оболочки, нет белков -гистонов. Содержится одна хромосома, представленная замкнутой в кольцо молекулой ДНК.
В цитоплазме могут находиться автономные кольцевые молекулы ДНК с меньшей молекулярной массой — плазмиды, где закодирована наследственная информаия. Плазмиды не являются жизненно необходимыми для клетки.
Мезосомы являются производными ЦПМ. Имеют разную форму: пузырьков, трубочек. Мезосомы связаны с нуклеоидом, Участвуют в делении клетки и спорообразовании. Характерны в основном для Гр- бактерий.
Рибосомы представляют собой рибонуклеопротеиновые частицы размером 20 нм, состоящие из 2-х субединиц. Участвуют в синтезе белков.
Включения являются продуктами метаболизма и используются в качестве запасных питательных веществ. К ним относятся включения гликогена, крахмала, серы, полифосфата (волютина и др).
Например у дифтерийной палочки, включения волютина имеют дифференциально-диагностическое значение.
Дополнительные структуры: капсула, микрокапсула, слизь, жгутики, фимбрии, пили; некоторые бактерии способны образовывать споры.
Капсулы в зависимости от степени выраженности подразделяют на микро- и макрокапсулы. Микрокапсулы обнаруживаются только при электронно- микроскопическом исследовании в виде микрофибрилл из мукополисахаридов, которые тесно прилегаю к КС. Макрокапсулы представляют собой выраженный слизистый слой, снаружи , покрывающий КС. Он состоит из полисахаридов и редко из полипептидов (например, у сибиреязвенных бактерий).
Макрокапсулу образуют некоторые виды патогенных бактерий при неблагоприятных условиях среды, например, в организме человека или животных (например, пневмококки и др).
Метаболизм как основа жизнедеятельности клетки
... энергетический обмены неразрывно взаимосвязаны. Процессы расщепления осуществляют энергетическое обеспечение процессов синтеза, а также поставляют необходимые для синтеза строительные вещества. Правильный обмен веществ поддерживает постоянство химического состава биологических систем, их внутренней среды. ...
У некоторых видов (клебсиеллы пневмонии) макрокапсула обнаруживается постоянно. Капсула выполняет многообразные функции:
- защитная,
- адгезивная, способствующая прилипанию к поверхности (рецепторам) клетки хозяина,
- связаны патогенные и антигенные свойства.
Жгутики обеспечивают подвижность бактерий. Состоят из белка флагеллина. Прикрепляются к базальному телу (диску), вмонтированному в ЦПМ и КС. Количество и расположение у разных бактерий неодинаково (монотрихи, перитрихи, лофотрихи — пучок жгутиков, амфитрихи — на обоих полюсах клетки).
Пили (синоним ворсинки, фимбрии) — тонкие полые нити белковой природы. В отличие от жгутиков не являются органами движения.
Споры и спорообразование. Споры бактерий можно рассматривать как форму сохранения наследственной информации бактериальной клетки в неблагоприятных условиях внешней среды. Внутри одной бактерии образуется одна спора. Спорообразование характерно для Гр+ бактерий. Споры обладают высокой термоустойчивостью, низким содержанием воды, повышенной концентрацией кальция.
Строение клеточной стенки. Особенности строения грамположительных и грамотрицательных бактерий
Клеточная стенка (КС) представляет биогетерополимер сложного химического состава. Состав у разных бактерий не одинаков.
В конце Х1Х в. датским ученым Грамом была предложена дифференциальная окраска, благодаря которой бактерии были разделены на 2 группы, названные грамположительные (Гр+) и грамотрицательными (Гр-).
Гр+ бактерии прочно удерживаю анилиновые красители и не обесцвечиваются спиртом, вследствие чего они окрашиваются генцианвиолетом в фиолетовый цвет. Это связано с образованием нерастворимого в спирте комплекса генциан-виолета с йодом. Гр- бактерии после обесцвечивания спиртом докрашиваются водным раствором фуксина в розовый цвет.
Основу клеточной стенки всех бактерий составляет мукопептид (синонимы: муреин, пептидогликан,), обеспечивающий ригидность и эластичность КС. Структура пептидогликана представлена паралллельными полисахаридными (гликановыми) цепями.
У грамположительных бактерий пептидогликан связан с тейхоевыми и липотейхоевыми кислотами за счет чего они имеют многослойную структуру. Тейхоевые кислоты являются производными риботола или глицерина и пронизывают пептидогликан насквозь.
У грамотрицательных бактерий пептидогликан однослойный и покрыт наружной мембраной с мозаичным строением. Наружная мембрана имеет трехслойную структуру (сходную с ЦПМ).
Основным компонентом этих мембран является бимолекулярный (двойной) слой липидов. В состав наружной мембраны входят фосфолипиды, липополисахариды (ЛПС), белки. Наружная мембрана пронизана белками -поринами — своеобразными выводными каналами, которые обеспечивают диффузию химических веществ из внешней среды в микробную клетку.
Особое значение имеет ЛПС, содержащийся в значительном количестве в составе КС грамотрицательных бактерий. ЛПС обладает антигенными и токсическими свойствами, поэтому его часто называют эндотоксином.
У грамотрицательных бактерий между КС и ЦПМ расположено периплазматическое пространство, заполненное гидролитическими ферментами, где происходит расщепление большинства питательных веществ, поступающих в бактериальную клетку.
У граположительных бактерий упомянутые ферменты выделяются в окружающую среду.
Надежность биотехнологических систем и охрана окружающей среды
... некоторые национальные документы. Кроме того, в текст Правил были включены требования в отношении объема доклинических испытаний, безопасности химических веществ и конкретные методические указания по ... документации. Они определяют обязанности фармацевтической промышленности (спонсоров исследований), клинических исследователей и тех, кто контролирует ход исследований. В них также включены указания о ...
Морфологические особенности актиномицет и микоплазм
Микоплазмы — бактерии утратившие клеточную стенку в процесс эволюции.
Они представляют собой мелкие сферические или овоидные клетки диаметром 0,2 мкм. Из-за отсутствия клеточной стенки могут иметь разнообразную форму: кокковидную, нитевидную, колбовидну. Существуют патогенные — Mycoplasma pneumoniae — вызывает заболевание по типу острой респираторной инфекции и непатогенные представители.
— Актиномицеты — ветвящиеся Гр+ бактери. Свое название (от греч. Actis -луч, myces-гриб) они получили в связи с образованием в пораженных тканях друз-гранул из плотно переплетенных нитей в виде лучей, отходящих от центра и заканчиваются колбовидными утолщениями. Акиномицеты, как и грибы, образуют мицелий — нитевидные переплетающиеся клетки (гифы), образующийся в результате врастания мицелия в питательную среду, и воздушный, растущий на поверхности среды. На воздушных гифах могут образовываться споры. Споры не термостойки.
Подавляющее большинство актиномицетов являются свободноживущими сапрофитными микроорганизмами. Патогенные виды встречаются среди представителей родов Actinomyces и Nocardia. Представители рода Nocardia напоминают микобактерии, но отличаются от них нитевидной формой. Патогенные актиномицеты вызывают актиномикозы, а нокардии — нокардиозы.
Многие актиномицеты, средой обитания которых является почва. Образуют антибиотики.
Морфологические особенности риккетсий и хламидий
Риккетсии — полиморфные бактерии, имеющие кокковидную, палочковидную, нитевидную форму. Облигатные внуритклеточные паразиты. Грамотрицательные. Названы в честь американского микробиолога Риккетса, впервые описавшего одного из возбудителей (пятнистая лихорадка Скалистых гор).
Многие виды патогенны для людей, вызывая острые лихорадочные заболевания — риккетсиозы (эпидемический сыпной тиф, эндемический -клещевой риккетсиоз, лихорадку цуцугамуши и др).
— Хламидии — мелкие неподвижные Гр- бактерии. Внутриклеточные паразиты. Вне клеток хозяина хламидии существуют в виде элементарных телец сферической формы 0,3 мкм. В клетке хозяина превращаются в ретикулярные тельца, которые начинают делиться. В результате деления в клетке образуются внутрицитоплазматические включения — микроколонии хламидий, содержащие промежуточные формы их развития. Покидая клетку, они превращаются в элементарные тельца. Элементарные тельца обеспечивают механизм передачи от человека к человеку. Цикл развития продолжается в течение 40-72 часов. У человека вызывают орнитозы, хламидиозы, трахому.
Питание бактерий
Микробы нуждаются в самых разнообразных веществах, одни из них используются для построения структурных элементов клетки, другие служат источником энергии. Поступление питательных веществ в бактериальную клетку происходит через оболочку. Она играет роль сита. Основным регулятором поступления веществ в клетку, является ЦПМ. Условно можно выделить 4 механизма проникновения питательных веществ в клетку:
- Простая диффузия, при которой перемещение питательных веществ происходит вследствие разницы их концентрации по обе стороны ЦПМ и происходит без затраты энергии.
— Облегченная диффузия происходит также в результате разницы концентрации веществ по обе стороны ЦПМ. Однако этот процесс осуществляется с помощью белков-переносчиков (пермиаз), протекает также без затраты энергии. Вещества перемещаются от более высокой концентрации к более низкой.
Понятие стерилизации, ее основные методы
... членах СЭВ радиационной стерилизации материалов и изделий медицинского назначения" и "Сводом ... применениями электронных технологий являются стерилизация изделий для ... СТЕРИЛИЗАЦИЯ Станция электронной стерилизации (дезинфекции) представляет собой современный высокотехнологичный комплекс, предназначенный для дезинфекции, дезинсекции и стерилизации медицинской ... разложения белковых веществ. Однако, высокая ...
- Активный транспорт происходит с помощью пермиаз и направлен на перенос веществ то меньшей концентрации в сторону большей, т.е. как бы против течения, поэтому этот процесс сопровождается с затратой энергии (АТФ).
- Транслокация (перенос) — связан с активным транспортом, отличается тем, что переносимая молекула видоизменяется в процессе переноса, например фосфорилируется.
Выход веществ из клетки осуществляется за счет диффузии и при участии транспортных систем.
Типы питания. Широкому распространению бактерий способствует разнообразие типов питания. Микроорганизмы нуждаются в углероде, азоте, сере, фосфоре, калии и других элементах.
По источникам углерода для питания бактерии делятся на аутотрофы (от греч. аutos — сам, trophe — пища), использующие для построения своих клеток СО2 и другие неорганические соединения (серобактерии, железобактерии, нитрофицирющие бактери), и гетеротрофы (от греч. нeteros — другой, за счет других питающийся) — питаются за счет готовых органических соединений. Они получают углерод из различных органических соединений: гексозы, многоатомные и одноатомные спирты, аминокислоты, огранические кислоты и др.
Гетеротрофы, питающиеся отмершими органическими веществами, называются сапрофитами. Гетеротрофы, вызывающие заболевания у человека или животных относят к патогенным и условно-патогенным. Среди патогенных микроорганизмов встречаются облигатные и факультативные паразиты. Облигатные паразиты способны существовать только внутри клетки (например, риккетсии, хламидии, некоторые простейшие).
По источнику азота микроорганизмы делятся на прототрофы, которые сами способны синтезировать необходимые для роста азотсодержащие органические соединения (аминокислоты, пурины, пиримидины, некоторые витамины) и ауксотрофы не способны синтезировать указанные соединения. Ауксотрофами чаще являются патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, которые ассимилируют эти соединения и другие факторы роста в готовом виде из организма человека (животных).
Кроме азота и углерода, всем микроорганизмам для биосинтетических реакций необходимы соединения, содержащие фосфор, серу, а также ионы Мg ,К, Са, Fе и другие микрозлементы.
Рост и размножение бактерий. Фазы размножения
Жизнедеятельность бактерий характеризуется ростом — формированием структурно-функциональных компонентов клетки и увеличением самой бактериальной клетки и размножением — самовоспроизведением, приводящим к увеличению количества бактериальных клеток в популяции.
Бактерии размножаются путем бинарного деления пополам, реже почкованием, спорами.
Размножение бактерий в жидкой питательной среде. Бактерии, засеянные в определенный объем питательной среды. Размножаясь, потребляют питательные вещества, что приводит в дальнейшем к истощению питательной среды и прекращение роста бактерий. При выращивании бактерий в жидкой питательной среде можно наблюдать последовательную смену фаз (периодов):
Реферат очистка воды и воздуха
... (сточные воды) и готовая продукция (очищенная вода) Методы очистки сточных вод можно разделить на механические, химические, физико-химические и биологические, когда же они применяются вместе, то метод очистки и обезвреживания сточных вод называется ...
- первая фаза начинается с высева культуры и продолжается до 2-х часов и называется стационарная или лаг-фаза. В это время клетки не растут и количество не увеличивается.
— Вторая фаза логарифмического роста характеризуется началом интенсивного роста, но скорость их деления невысокая. Эти 2 фазы называют периодом адаптации, продолжительность определяется возрастом культуры, количеством и качеством питательной среды.
- Третья фаза — экспоненциальная (логарифмическая) отличается максимальной скоростью размножения клеток и увеличением численности в геометрической прогрессии
- 1У — фаза отрицательного ускорения, характеризуется замедлением темпа размножения. Это происходит в результате истощения питательной среды, накопления в ней продуктов метаболизма.
- У -максимальная стационарная фаза, характеризуется равновесием между количеством погибших, вновь образующихся и находящихся в состоянии покоя клеток.
- У1 -фаза гибели бактерий и сменяется
- У11 — фаза уменьшения скорости отмирания клеток.
Продолжительность отдельных фаз размножения у различных видов бактерий варьирует. Так, у кишечной, дизентерийной, брюшнотифозной палочек, которые делятся каждые 20-30 минут. Длительность первых 2-х фаз составляет примерно 1-2 часа, 3-я фаза — 5-6 часов, 5-ая фаза — 12-16 часов. У медленно делящихся микробов, например. микобактерий туберкулеза, фазы размножения удлиняются, и культура вырастает через 10-14 дней и более.
Искусственные питательные среды, их классификация, требования к ним
Питательные среды по консистенции делятся на плотные, полужидкие, жидкие. По составу могут быть простыми и сложными.
Простые (основные) среды (МПА,МПБ) используют для выращивания многих микробов. В состав сложных сред входят дополнительные компоненты: сыворотка крови, сахара и др. По целевому назначению: обогащенные, элективные, специальные, дифференциально-диагностические.
Обогащенные среды многие виды бактерий не растут на простых средах, поэтому в основные среды добавляют кровь, сыворотку крови, углеводы и т.д.
Элективные (избирательные) для выращивания определенных видов бактерий, например, молоко для молочнокислых бактерий, ЖСА — для стафилококков, среда Кауфмана — для сальмонелл.
Специальные — так называют среды, разработанные с учетом специфических ростовых потребностей ряда бактерий. Например, желточная среда Мак-Коя для возбудителя туляремии, среда Терских (фосфатная смесь-сыворотка) — для лептоспир.
Дифференциально-диагностические — позволяют различить бактерии разных видов по их культуральным и биохимическим свойствам. К ним относятся Эндо, Левина, Плоскирева, Гисса и др.
Для культивирования микроорганизмов необходимы определенные условия — это температура, время культивирования, значение рН среды, состав питательных сред.
- Время культивирования находится в прямой зависимости от времени генерации вида бактерий и находится в пределах от 18-20 часов для энтеробатерий, до 3-4 недель для микобактерий.
- По температуре культивирования все микроорганизмы делят на 3 группы: психроилы (холодолюбивые) способны расти и размножаться при температуре 10-15о;
- мезофилы — оптимальная температура их роста 30-37о;
- термофильные — при температуре выше 45о.
- Значение рН среды культивирования находится в пределах от 6,7. Добавки в питательную среду католита нейтрального с рН 7,5 единиц ускоряет рост всех бактерий.
- Питательная среда должна отвечать следующим требованиям: содержать все необходимые вещества в легкоусвояемой форме, иметь оптимальную влажность, вязкость.
РН, быть изотоничной и по возможности прозрачной.
Микрофлора окружающей среды
... бактерицидные лампы (облучение УФЛ) и др. Состояние качества атмосферного воздуха и характеристики источников загрязнения атмосферы микрофлора окружающая среда Во многих городах России неблагоприятная ... группами микроорганизмов. Жизнь на Земле непрерывна, поскольку все основные элементы жизни подвергаются циклическим превращениям, в значительной степени определяемых микроорганизмами. Воздух зимой ...
Для культивирования анаэробов используют специальные питательные среды и газовые смеси. Последними наполняют анаэростаты. Для создания условий анаэробиоза питательные среды максимально освобождают от кислорода путем кипячения, а также пропуская через жидкие среды инертные газы или наслаивая на поверхность питательной среды вазелиновое масло.
Среда Вильсона-Блера (железосульфитный агар) для культивирования анаэробов состоит из МПА, к которому добавляют глюкозу, Na 2SO3, FeCl2 (хлорид железа).
Среда Китта-Тароции состоит из МПБ, 0,5% глюкозы, кусочков печени или мясного фарша для адсорбции воздуха, викасола и гимина. Перед посевом среду прогревают на водяной бане 10-15 мин для удаления воздуха и заливают слоем вазелиного масла.
Дисбактериозы. Использование пробиотиков в животноводстве
Дисбактериоз у животных — изменение нормальной микрофлоры животного организма, характеризующееся уменьшением количества или полным исчезновением типичных для данной области микробов и появлением атипичных форм. При дисбактериозе резко нарушается основная деятельность нормальной микрофлоры кишок — её антагонистическая активность в отношении патогенных микробов, а также витаминобразующая функция, что способствует снижению резистентности организма. Дисбактериоз часто возникает при нерациональной антибиотикотерапии, вызывающей гибель чувствительной к антибиотикам нормальной микрофлоры и бурное размножение устойчивой к ним флоры, например, грибов — возбудителей кандидамикоза, стафилококков, патогенных типов кишечной палочки и др. Одной из важнейших причин развития дисбактериозов у животных является нарушение в режиме кормления, в частности, вскармливание плотоядным (собаке и кошке) большого количества углеводистой пищи (каши, сухие корма и т.д.).
В большинстве случаев дисбактериоз является началом развития массы вторичных проблем со здоровьем таких, как гастрит, гастроэнтерит, гепатит, панкреатит, аллергии, снижение резистентности организма и т.д.
Пробиотики это натуральные, естественные представители нормальной микрофлоры кишечника и окружающей среды, которые не только профилактируют и излечивают заболевания, но еще и влияют на рентабельность разведения животных. Это и увеличение продуктивности (яйценоскость, молокоотдача, привесы живой массы), недопущение крупных затрат на препараты для лечение возникающих заболеваний, увеличение конверсии корма, увеличение сохранности молодняка, избежание негативного воздействия при незначительных погрешностях рациона.
Желудочно-кишечный тракт — основная цель действия пробиотика и так случилось, что это цель номер один для вредоносных микроорганизмов попадающих туда с кормом и питьевой водой.
В ЖКТ животного проходят одни из самых важных в жизни животного процессов: 80% иммунитета располагаются в кишечнике, синтез витаминов и аминокислот, переваривание пищи и усвоение всех необходимых витаминов и минералов из корма, утилизация продуктов обмена.
Использование пробиотика в разведении животных, на данный момент является уже неотъемлемой частью процесса. Особое внимание уделяется выпойке молодняка непосредственно с первых дней жизни. Что способствует формированию здорового и устойчивого к заболеваниям поголовья.
Действие химических и физических факторов на микроорганизмы. Понятие о стерилизации, дезинфекции
Влияние температуры. Для каждого вида бактерий имеется определенная оптимальная температура развития, поэтому бактерии делят на 3 физиологические группы: психрофильные, мезофильные, термофильные.
Высокие и низкие температуры по-разному влияют на микробы. При низких температурах микробная клетка переходит в состояние анабиоза, в котором она может существовать длительное время. Низкие температуры приостанавливают гнилостные и бродильные процессы. На этом принципе построено сохранение продуктов в ледниках, холодильниках. В микробиологической практике широко применяется длительное хранение культур микробов, иммуноглобулинов, живых вакцин в высушенном виде из замороженного состояния.
Высокая температура губительно действует на микроорганизмы. Применение высокой температуры является самым распространенным и надежным способом стерилизации — уничтожения микробов и их спор. Существуют разные способы стерилизации при помощи высокой температуры:
Прокаливание в пламени спиртовки или газовой горелки -данный способ применяется ограниченно, например для стерилизации бактериологических петель.
Кипячение — производят в течение 30-45 мин. Однако данный метод не обеспечивает полной стерилизации, так как споры бактерий и некоторые вирусы, защищенные плазмой крови при этом не погибают.
Стерилизация сухим жаром проводится в сушильном шкафу (сухожаровом шкафу или печи Пастера).
Метод основан на бактерицидном действии нагретого до 165-170 0С воздуха. Сухим жаром стерилизуют стеклянную посуду: чашки Петри, пробирки, и др. Используют следующие температурные режимы и время выдержки стерилизуемого материала:
- 160 -165 0С в течение 150 мин.
- 180 0С в течение 60 мин.
Стерилизация паром под давлением. Это один из наиболее эффективных методов стерилизации, основанный на сильном гидролизующем действии насыщенного пара. Паровой стерилизации подвергают перевязочный материал — бинты, шовный материал, вату, белье, изделия из резины, стекла, некоторых полимерных материалов, питательные среды, лекарственные препараты и т.д.
В микробиологической практике используют следующие режимы и экспозицию:
- 110-112 0С — 0,5 атм. -среды с углеводами в течение 15 мин.,
- 120 0С — 1 атм.
-перевязочный материал, белье, среды — МПБ, МПА. стеклянная посуда в течение 15-20 мин.,
- 132-134 0С — 1,5 — 2 атм. — весь инфицированный материал в течение 20-25 мин.
Стерилизация текучим паром — при температуре 1000С применяется в тех случаях, когда материал не выдерживает более высокой температуры (например, питательные среды с витаминами, углеводами, желатином и др.).
Стерилизацию проводит в аппарате Коха или в автоклаве при не завинченной крышке и открытом выпускном кране. Метод основан на антибактериальном действии пара в отношении вегетативных клеток. Для полного обеспложивания применяют принцип дробной стерилизации, т.е. стерилизуют материал при 100 0С (или 80-90 0С) в течение 20-30 мин. 3 дня подряд. При этом вегетативные клетки погибают, а споры сохраняются и за сутки прорастают. Последующее двукратное прогревание обеспечивает достаточно надежную стерильность материала.
Тиндализация — это дробная стерилизация материалов при 56-58 С в течение часа 5-6 дней подряд для уничтожения не споровых микроорганизмов. Применяется для стерилизации легко разрушающихся при высокой температуре веществ (сыворотка крови, витамины и др.)
Пастеризация основана на антибактериальном действии температуры в отношении вегетативных клеток, но не бактериальных спор. Применяется для пастеризации пищевых продуктов (пиво, вино, соки, молоко и др.).
Влияние высушивания. Высушивание сопровождается обезвоживанием цитоплазмы и денатурацией белков.
Действие ультрафиолетовых лучей применяется для стерилизации воздуха в микробиологических лабораториях, боксах, операционных, в животноводческих помещениях и т.д. Для этого используют бактерицидные лампы различной мощности. Метод основан на бактерицидном действии УФ — лучей с длиной волны 260-300 мкм. Однако полного освобождения от микробов не происходит.
Ионизирующая радиация (рентгеновские лучи).
Механизм действия рентгеновских лучей заключается в повреждении генетического аппарата микробной клетки, что приводит к летальному исходу или возникновению мутаций. Ионизирующую радиацию применяют для уничтожения микробов на инструментах, в перевязочном материале, биопрепаратах — холодная стерилизация.
Влияние ультразвука. Вызывает деполяризацию органоидов микробных клеток и денатурацию составляющих их молекул (в результате местного нагревания).
Действие химических факторов.
Химические вещества могут оказывать различное действие на микроорганизмы: служить источниками питания, не оказывать какого-либо влияния, стимулировать или подавлять рост. Химические средства, применяемые для обработки помещений, оборудования и различных предметов, обозначают термином — дезинфектанты, а вещества, используемые для обработки живых тканей — антисептики. Дезинфицирующие средства оказывают в используемых концентрациях бактерицидное действие, а антисептики в зависимости от концентрации — бактериостатическое или бактерицидное.
По механизму действия химические вещества можно разделить на несколько групп.
Галогены и галогеносодержащие препараты (препараты йода и хлора) широко применяют как дезинфектанты и антисептики: спиртовой раствор йода, йодинол, хлорная известь, хлорамин, хлоргексидин. Бактерицидное действие галогенов связано с одной стороны, способностью, отщеплять активные галогены — хлор, йод, которые, замещая водородные атомы у атомов азота, денатурируют белки цитоплазмы микроорганизмов, с другой стороны, выделяя атомарный кислород, обладают окисляющими свойствами.
Окислители. Механизм антимикробной активности связан с окислением метаболитов и ферментов микроорганизмов либо денатурацией последних. К окислителям относятся перекиси водорода, гидроперит, перманганат калия.
Кислоты и щелочи. В основе бактерицидного действия кислот и щелочей лежат дегидратация (обезвоживание) микроорганизмов, изменение рН питательной среды, гидролиз коллоидных систем и образование кислотных или щелочных альбуминатов.
Поверхностно-активные вещества или детергенты. К ним относятся жирные кислоты, обычные мыла, многие полимерные соединения ( септодор, гермосепт, дюльбаль и др).
Используют в качестве дезинфектантов и антисептиков. Эти вещества изменяют заряд клеточной мембраны, нарушают проницаемость и осмотическое равновесие микробной клетки, что приводит к ее гибели.
Спирты (70-80% этанол, 60-70% пропанол) Практический интерес представляет этиловый спирт (С Н ОН).
Спирты способны отнимать воду и свертывать белок. Бактерицидное действие спирта проявляется с 3-5% концентрации, наиболее сильное противомикробное действие оказывает 70% спирт. Как антисептики наиболее эффективны при использовании в виде 60-70%. С 70% и выше эффект исчезает, происходит дубление, т.е. отнятие воды из микробной клетки, которая фиксируется на объекте, и добавление воды, клетка восстанавливает жизнеспособность.
Альдегиды (формальдегид, уросал и др.) вызывают денатурацию белков. Формальдегид убивает как вегетативные формы, так и споры. Применяется в виде 40% р-ра (формалина) для дезинфицирующих целей.
Соли тяжелых металлов — ртути, серебра, меди, свинца, цинка, олова) вызывают коагуляцию белков клетки. Механизм бактерицидного действия заключается в том, что положительно заряженные ионы металлов адсорбирубтся отрицательно заряженной поверхностью бактерий и изменяют проницаемость их ЦПМ, что приводит к гибели бактерий. В качестве антисептиков широко используют нитрат серебра (ляпис), сульфат меди (медный купорос), дихлорид ртути (сулема), колларгол, протаргол и др.
Фенол и его производные (фенол, лизол, гексахлорофен, и др.) применяют как дезинфектанты, в меньших концентрациях — как антисептики. Препараты денатурируют белки и нарушают структуру клеточной стенки.
В качестве антисептиков давно и эффективно применяют различные красители (например, метиленовый синий, бриллиантовый зеленый, риванол или основной фуксин) которые обладают свойством задерживать рост бактерий.
По механизму действия на белок микробной клетки и вирусной частицы химические вещества делятся на 4 группы: окислители, коогулянты, гидролизанты, денатуранты.
- окислители галогены и галогеносодержащие (препараты хлора, йода, брома), перекись водорода, перманганат калия, кислоты.
- коогулянты — фенол и его производные, кислоты, соли тяжелых металлов, спирты,
- гидролизанты — щелочи, мыла,
- денатуранты — альдегиды, кислоты, красители
Понятие о стерилизации, дезинфекции.
Физические, химические, биологические факторы внешней среды обладают широким спектром действия на микроорганизмы. Использование этих факторов в лечебной и профилактической практике строго регламентируется государственным стандартом (ГОСТ), фармакопеей России, отраслевыми стандартами, государственным реестром лекарственных средств Росси, а также санитарными правилами и нормами Сан Пин).
В лечебно-профилактических учреждениях использование этих 3-х факторов определяется системой мер, объединенных в понятие асептика.
Дезинфекция. Буквальный перевод — обеззараживание. Термин был введен Пастером. Дезинфекция — это комплекс мероприятий направленных на уничтожение или резкое подавление патогенных и условно-патогенных микроорганизмов во внешней среде. Внешняя среда — помещение, предметы обихода и быта, выделения больных, инструменты, лекарственные вещества и т.д. Целью дезинфекции является предупреждение передачи возбудителя от инфицированного организма неинфицированному через объекты окружающей среды. В зависимости от цели различают профилактическую, текущую, заключительную дезинфекцию.
Стерилизация -это полное уничтожение всех микроорганизмов и их спор на обеззараживаемом объекте.
Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха
Воздух не является благоприятной средой для жизнедеятельности микроорганизмов. Однако, попадая в воздух, многие микроорганизмы способны какое-то время находиться в жизнеспособном состоянии. Среди них большая группа патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.
Отбор проб, как и при исследовании любого объекта, является наиболее ответственным. Правильное взятие проб гарантирует точность исследования. В закрытых помещениях точки отбора проб устанавливаются из расчета на каждые 20 м2 площади — одна проба воздуха, по типу конверта: 4 точки по углам комнаты (на расстоянии 0,5 м от стен) и 5-я точка — в центре.
Все методы отбора проб воздуха можно разделить на седиментационные и аспирационные.
Седиментационный — наиболее старый метод, широко распространен благодаря простоте и доступности, однако является неточным. Метод предложен Р. Кохом и заключается в способности микроорганизмов под действием силы тяжести и под влиянием движения воздуха (вместе с частицами пыли и капельками аэрозоля) оседать на поверхность питательной среды в открытые чашки Петри. Чашки устанавливаются в точках отбора на горизонтальной поверхности. При определении общей микробной обсемененности чашки с мясопептонным агаром оставляют открытыми на 5—10 мин или дольше в зависимости от степени предполагаемого бактериального загрязнения. При определении санитарно- показательных микроорганизмов чашки оставляют открытыми в течение 40—60 мин.
По окончании экспозиции все чашки закрывают, помещают в термостат на сутки для культивирования при температуре, оптимальной для развития выделяемого микроорганизма, затем (если этого требуют исследования) на 48 ч оставляют при комнатной температуре для образования пигмента пигментообразующими микроорганизмами.
Более совершенными методами являются аспирационные, основанные на принудительном осаждении микроорганизмов из воздуха на поверхность плотной питательной среды или в улавливающую жидкость (мясо-пептонный бульон, буферный раствор, изотонический раствор хлорида натрия и др.).
В практике санитарной службы при аспирационном взятии проб используются аппарат Кротова, бактериоуловитель Речменского, прибор для отбора проб воздуха (ПОВ-1), пробоотборник аэрозольный бактериологический (ПАБ-1), бактериально-вирусный электропреципитатор (БВЭП-1), прибор Киктенко, приборы Андерсена, Дьяконова, МБ и др.
Прибор Кротова. Принцип работы аппарата Кротова основан на том, что воздух, просасываемый через клиновидную щель в крышке аппарата, ударяется о поверхность питательной среды, при этом частицы пыли и аэрозоля прилипают к среде, а вместе с ними и микроорганизмы, находящиеся в воздухе. Чашку Петри с тонким слоем среды укрепляют на вращающемся столике аппарата, что обеспечивает равномерное распределение бактерий на ее поверхности. Работает аппарат от электросети. После отбора пробы с определенной экспозицией чашку вынимают, закрывают крышкой и помещают на 48 ч в термостат. Обычно отбор проб проводят со скоростью 20-25 л/мин в течение 5 мин.
Таким образом, определяется флора в 100-125 л воздуха. При обнаружении санитарно-показательных микроорганизмов объем исследуемого воздуха увеличивают до 250 л.
Микрофлора воды. Методы санитарно-бактериологического исследования воды, показатели ее качества
Вода является естественной средой обитания микробов, основная масса которых поступает из почвы, воздуха, с отбросами, стоками, выделениями человека и животных (мочой, калом) и т.д. Особенно много микроорганизмов в открытых водоемах и реках. К постоянно живущим в воде микроорганизмам относятся: азотбактер, нитробактер, псевдомонады, протеи, спириллы и др. Кроме сапрофитов в воде может быть возбудители инфекционных заболеваний животных и человека: возбудители дизентерии, сальмонеллезов, лептоспироза, и др.
Санитарно-микробиологическое состояние воды оценивают по ОМЧ, коли-титру и коли-индексу.
Общее микробное число (ОМЧ) в воде определяют путем посева воды в стерильные чашки Петри, в которые затем добавляют расплавленный и остуженный до 42—45°С агар. При исследовании чистой воды засевают 1 мл, а при исследовании загрязненных вод делают посевы по 1 мл определенных разведений воды (1 : 10— 1 : 100 и более).
Чашки помещают в термостат при 37°С на 24 ч (или при 20—22°С на 48 ч) и по истечении срока инкубации подсчитывают все колонии, выросшие как на поверхности агара, так и в глубине его, выбирая чашки, в которых наиболее удобно произвести подсчет колоний.
Общее количество бактерий определяют в пересчете на число колоний, выросших при посеве 1 мл воды. Считают, что в чистой воде общее количество бактерий должно быть не более 100 в 1 мл воды, в воде сомнительной чистоты— от 100 до 1000, в загрязненной — свыше 1000. Общее количество бактерий в 1 мл водопроводной воды не должно превышать 100; для колодцев и открытых водоемов допускают до 1000.
Определение санитарно-показательных микроорганизмов.
Интенсивность фекального загрязнения воды характеризуют два показателя:
1) коли-индекс—количество кишечной палочки, обнаруженное в 1 л воды;
2) коли-титр — наименьшее количество миллилитров воды, в котором обнаруживают БГКП.
Для определения количества БГКП используют метод мембранных фильтров, который основан на концентрировании определенных объемов воды на мембранных фильтрах с последующим посевом их на среду Эндо. Бродильные (титрационные) методы, предусматривают посев определенного количества воды на среды обогащения, а метод прямого посева — определенных разведений воды на среду Эндо. Бродильный метод удлиняет срок анализа на сутки.
Метод мембранных фильтров. Сущность метода заключается в концентрации БГКП из определенного объема воды на мембранном фильтре, выращивании их при 37°С на среде Эндо, дифференциации выросших колоний и определении коли-индекса. Перед употреблением фильтры стерилизуют 10 мин кипячением в дистиллированной воде, меняя ее 3—5 раз. Мембранные фильтры помещают в фильтровальный аппарат Зейтца. После фильтрации пробы воды мембранный фильтр переносят на среду Эндо, разлитую в чашки Петри. Поверхность фильтра с осевшими на нее микробами должна быть обращена вверх. Посевы выдерживают в термостате при 37°С в течение 18—24 ч. Если на фильтрах вырастают колонии, характерные для БГКП: красные, темно-красные с металлическим блеском или без него (лактозоположительные), из них готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют.
Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах
Для оценки санитарно-гигиенического состояния объектов окружающей среды проводят санитарно-микробиологические исследования, которые позволят оценить опасность воды, воздуха, почвы и других объектов. Показателем неблагополучия является выявление патогенных микроорганизмов.
Санитарно-микробиологическое состояние объектов окружающей среды оценивают по ОМЧ (общему микробному числу микроорганизмов, содержащихся в единице объема или массы — 1мл воды, 1г почвы, 1м3 воздуха) объекта и обнаружение в нем санитарно-показательных микроорганизмов.
Содержание санитарно-показательных бактерий определяют по двум показателям: титру и индексу. Титр — это минимальный объем или масса, в котором выявляют бактерии. Индекс — это количество санитарно-показательных бактерий, содержащихся в соответствующем количестве среды.
К санитарно-показательным микроорганизмам относятся представители облигатной микрофлоры организма человека и животных, для которых средой обитания является кишечник или дыхательные пути. Они характеризуются следующими свойствами:
- постоянно выделяются с фекалиями или капельками слизи из дыхательных путей;
- не имеют других мест обитания;
- способны сохраняться в окружающей среде то же время, что и патогенные бактерии, паразитирующие в кишечнике или воздушно-дыхательных путях;
- не способны размножаться вне организма хозяина и изменять свои свойства.
Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней
Микробиологические (бактериологические, микологические, вирусологические) методы основаны на выделении чистой культуры возбудителя и ее последующей идентификации на основании морфологических, культуральных, биохимических, антигенных (серологических) и других признаков. Располагая чистой культурой бактерий, можно определить их родовую и видовую принадлежность, факторы патогенности, а также чувствительность к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам. Микологические исследования осуществляются реже, чем бактериологические, поскольку микроскопическая диагностика микозов достаточно надежна. Микологические исследования проводят при диагностике кандидозов путем определения нарастания количества клеток дрожжеподобных грибов рода Candida, а также глубоких микозов.
Вирусологический метод является наиболее достоверным в диагностике вирусных инфекций. Однако его трудоемкость, связанная с приготовлением культуры клеток, обработкой исследуемого материала, а также со сравнительно частым получением отрицательных результатов, ограничивают применение данного метода. Кроме того, он требует затраты сравнительно большого времени, особенно при проведении «слепых» пассажей. Во многих случаях вирусологический метод используют для ретроспективной диагностики вирусных инфекций.
Все микробиологические методы имеют определяющее значение в лабораторной диагностике, являются наиболее информативными и достоверными, особенно если они подтверждены дополнительными серологическими данными.
Реакция агглютинации (РА): компоненты, механизм, способы постановки
Реакция агглютинации — простая по постановке реакция, при которой происходит связывание антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других клеток, нерастворимых частиц с адсорбированными на них антигенами, а также макромолекулярных агрегатов).
Она протекает при наличии электролитов, например при добавлении изотонического раствора натрия хлорида.
Реакция агглютинации проявляется образованием хлопьев или осадка (клетки, «склеенные» антителами, имеющими два или более антигенсвязывающих центра).
Реакция агглютинации используют для определения антител в сыворотке крови больных животных.
Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации: к разведениям сыворотки крови больного добавляют диагностикум (взвесь убитых микробов) и через несколько часов инкубации при 37 ?С отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т. е. образовался осадок.
Характер и скорость агглютинации зависят от вида антигена и антител. Примером являются особенности взаимодействия диагностикумов (О- и H-антигенов) со специфическими антителами. Реакция агглютинации с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие термостабильный О-антиген) происходит в виде мелкозернистой агглютинации. Реакция агглютинации с Н-диагностикумом (бактерии, убитые формалином, сохранившие термолабильный жгутиковый Н-антиген) — крупнохлопчатая и протекает быстрее.
Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентировочную реакцию агглютинации, применяя диагностические антитела (агглютинирующую сыворотку), т. е. проводят серотипирование возбудителя. Ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле. К капле диагностической агглютинирующей сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больного. Рядом ставят контроль: вместо сыворотки наносят каплю раствора натрия хлорида. При появлении в капле с сывороткой и микробами хлопьевидного осадка ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с увеличивающимися разведениями агглютинирующей сыворотки, к которым добавляют по 2—3 капли взвеси возбудителя. Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени просветления жидкости. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмечается в разведении, близком к титру диагностической сыворотки. Одновременно учитывают контроли: сыворотка, разведенная изотоническим раствором натрия хлорида, должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе — равномерно мутной, без осадка.
Разные родственные бактерии могут агглютинироваться одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, что затрудняет их идентификацию. Поэтому пользуются адсорбированными агглютинирующими сыворотками, из которых удалены перекрестно реагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактериями. В таких сыворотках сохраняются антитела, специфичные только к данной бактерии.
Реакция преципитации (РП): компоненты, механизм, постановка, применение
